ABSTRACT Introduction. The World Health Organization (WHO) recommends conducting nationally representative studies to estimate the prevalence of HIV pretreatment resistance to antiretrovirals (PDRs) to assess the effectiveness of first-line therapies. The objective of the present study was to determine the prevalence of PDR in Cuban adults infected with HIV-1. Methods. HIV resistance to antiretrovirals was determined in 610 Cuban patients in two time periods (469 patients between 2009-2016 and 141 patients during the national survey of HIV-1 PDR conducted during 2017, according to the recommendations issued by the WHO). Results and Discussion. In the period 2009-2016, 19% of the patients presented viruses with some mutation associated with the PDR of HIV-1 to antiretrovirals (10,4 % to some nucleoside reverse transcriptase inhibitor (NRTI), 12,8 % to some non nucleoside reverse transcriptase inhibitor (NNRTI), 2,8 % to some protease inhibitor (PI). In 2017, the prevalence of PDR was 29,8 % (95 %, CI 22,3-38.1). The prevalence was 10,6 % (95 %, IC 6,07-16,9) for some NRTI, 23,4 % (95 %, CI 16,7-31,3) for some NNRTI, and 1,4 % (95 %, CI 0,17-5,03) for some PI. It was concluded that the NNRTI prevalence above 10 % in our study indicates that the first-line antiretroviral therapy in Cuba may be less effective and supports the need to look for new treatment options.

RESUMEN Introducción. La Organización Mundial de la Salud (OMS) recomienda la realización de estudios representativos a nivel nacional para estimar la prevalencia de la resistencia pretratamiento del VIH a los antirretrovirales (PDR) para evaluar la efectividad de las terapias de primera línea. El objetivo del presente estudio fue determinar la prevalencia de PDR en adultos cubanos infectados por el VIH-1. Métodos. Se determinó la resistencia del VIH a los antirretrovirales a 610 pacientes cubanos en dos períodos de tiempo (469 pacientes entre 2009-2016 y 141 pacientes durante la encuesta nacional de PDR del VIH-1 efectuada durante el año 2017, según las recomendaciones emitidas por la OMS). Resultados y Discusión. En el período 2009-2016, el 19 % de los pacientes presentaron virus con alguna mutación asociada a la PDR del VIH-1 a los antirretrovirales (10,4 % a algún inhibidor de la transcriptasa inversa análogo de nucleósidos (ITIAN), 12,8 % a algún inhibidor de la transcriptasa inversa no análogo de nucleósidos (ITINAN), 2,8 % a algún inhibidor de proteasa (IP). En el año 2017, la prevalencia de PDR fue de 29,8 % (95 %, IC 22,3-38,1). La prevalencia fue de 10,6 % (95 %, IC 6,07-16,9) para algún ITIAN, 23,4 % (95 %, IC 16,7-31,3) para algún ITINAN y 1,4 % (95 %, IC 0,17-5,03) para algún IP. Se concluyó que los valores por encima del 10 % en la prevalencia de la PDR a los ITINAN evidencia el comprometimiento de la primera línea de terapia antirretroviral empleada en Cuba y la necesidad de buscar nuevas opciones de tratamiento.

The validation of the capacity of viral clearance in the manufacturing processes of biopharmaceuticals is a regulatory requirement in Cuba. It is recommended to introduce the pasteurization in the manufacturing processes of serum albumin as a method of inactivating viruses. The objective of this study was to validate the capacity of viral inactivation in the phase of pasteurization of the 20 % and 25 % human albumin production process The viral models covering the possible pollutants of the raw materials were diluted at 1:10 in albumin in 2 concentrations and they were heat-treated at 60 °C for 10 h. Several samples at different time intervals were taken to design the inactivation kinetic curves. The reduction factor of pasteurization for each virus was estimated. The treatment of 20 % and 25 % albumin at 60 °C decreased significantly the initial viral load in the stage, with p< 0.002 and p< 0.021 respectively. The reduction factors exceeded 4 log of the titers of all viruses. The stage of pasteurization gave adequate level of safety to the 20 % and 25 % human albumin.

La validación de la capacidad de aclaramiento viral de los procesos de fabricación de productos biológicos constituye un requisito regulatorio en Cuba. Se recomienda introducir la pasteurización en los procesos de producción de la albúmina como un método capaz de inactivar virus; por ello, el objetivo del estudio fue validar la capacidad de inactivación viral de la etapa de pasteurización del proceso de producción de la albúmina humana al 20 y 25 %. Los modelos virales que abarcan los posibles contaminantes de la materia prima, se diluyeron 1:10 en la albúmina en sus 2 concentraciones y se sometieron a tratamiento térmico a 60 °C durante 10 h. Se tomaron muestras a diferentes intervalos de tiempo para la confección de las curvas de cinética de inactivación. Se determinó el factor de reducción aportado por la pasteurización para cada virus. El tratamiento a 60 °C de la albúmina al 20 y 25 % disminuyó significativamente la carga viral inicial con que se retó la etapa, con valores de p< 0,002 y p< 0,021, respectivamente, y se obtuvieron factores de reducción superiores a 4 log del título de todos los virus. La etapa de pasteurización le aportó a la albúmina humana al 20 y 25 % un adecuado nivel de seguridad.

By the classic biological assays it has been possible to determine the use of HIV-1 strains co-receptor, which have been classified in R5, X4 or R5/X4, characteristic related to the NIS or IS phenotype and to the clinical course. By bio-information methods the amino acid changes in the region of V3 loop of the env using the co-receptor. In present paper are showed the results of a characterization study of eleven strains from HIV-1 infected subjects, five seropositive and six with a fast progression to AIDS. Authors compared the results of phenotype study conducted by two classic assays, use of co-receptors and ability to induce syncytia in MT2 and three bio-information methods, rule 11/25, point matrices in specific locations (PSSM) and the geno2pheno program. The five strains from asymptomatic seropositive patients coincided according all methods used as R5/NIS. Five of the six strains from fast progression patients were classified as R5/X4 and IS by biological assays; whereas two were classified as R5/X4 by Geno 2 Pheno, one by PSSM and all were pure X4 by the rule 11/25. The assays used in the study allowed us to characterize the isolated strains and to relate the phenotype to the infection course, thus, we considered that using biological assays or bio-information methods it is possible to conduct characterization studies, its usefulness depends on the pursued objectives.

Mediante ensayos biológicos clásicos se ha podido determinar el uso del correceptor por las cepas de VIH-1, las cuales se han clasificado en R5, X4 o R5/X4, características que guardan relación con el fenotipo NIS o IS y con la evolución clínica. Por métodos bioinformáticos se han relacionado cambios aminoacídicos en la región del lazo V3 del env con el uso del correceptor. En este trabajo se presentan los resultados del estudio de caracterización de once cepas provenientes de individuos infectados con VIH-1, cinco de ellos seropositivos asintomáticos y seis progresores rápidos al SIDA. Se compararon los resultados del estudio fenotípico realizado por dos ensayos biológicos clásicos, uso de correceptores y capacidad de inducir sincicios en MT2 y tres métodos bioinformáticos, regla 11/25, matrices de puntos en posiciones específicas (PSSM) y el programa geno2pheno. Las cinco cepas de seropositivos asintomáticos coincidieron por todos los métodos como R5/NIS. Cinco de las seis cepas de progresores rápidos se clasificaron R5/X4 e IS por los ensayos biológicos; mientras dos clasificaron R5/X4 por Geno 2 Pheno, una por PSSM y todas fueron X4 puras por la regla 11/25. Los ensayos utilizados en el estudio permitieron caracterizar las cepas aisladas y relacionar el fenotipo con la evolución de la infección, por lo que valoramos que por ensayos biológicos o métodos bioinformáticas se pueden hacer estudios de caracterización, su utilidad está en dependencia del objetivo que se persiga.

BACKGROUND: viral quantification is essential to demonstrate biological product safety during the validation of the production process. OBJECTIVE: to evaluate the accuracy, linearity and detection limit of a titration method for the human immunodeficiency virus type 1. METHODS: the titration was performed by calculating the end-point dilution method, through the cytopathic effect assay and the determination of Ag p24 production by an enzyme immunoassay. Mean infective dose in cultured cells per milimeter was estimated by Reed and Muench´s method. RESULTS: the accuracy of the method was similar to that of the reference titration, the variation coefficient figures for accuracy (repeatability and intermediate accuracy) were lower than 5 % and 10 %, respectively, the linearity showed adequate correlation coefficient and the detection limit was determined in the 10-12 dilution CONCLUSIONS: the evaluated method was suitable for viral quantification

INTRODUCCIÓN: en la validación de los procesos de producción de productos biológicos, la cuantificación viral es esencial para demostrar su seguridad. OBJETIVO: en este trabajo se evaluó el método de titulación del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1, para ello se determinó la exactitud, precisión, linealidad y límite de detección. MÉTODOS: la titulación se realizó por el método del cálculo de la dilución punto final, mediante la visualización del efecto citopático y la determinación de la producción de antígeno p24 por medio de un ensayo inmunoenzimático, la dosis infectiva media en cultivo de células por mililitro se calculó según el método de Reed y Muench. RESULTADOS: la exactitud del método coincidió con el título de referencia, los valores del coeficiente de variación de la precisión (repetibilidad y precisión intermedia) fueron menores que 5 y 10 %, respectivamente; la linealidad mostró un adecuado coeficiente de correlación y el límite de detección se determinó en la dilución 10-12. CONCLUSIONES: el método evaluado demostró un adecuado desempeño para la cuantificación viral.

Six different fractions from the bark of Pinus caribae Moralet var. caribae were faced in five different concentrations against two viral doses (MOI 0,1 y 0,01) in a vitro assay on MT4 cell lines; the antiviral activity was measured by p24 Ag capture ELISA assay (DAVIH Agp24). All the fractions showed a mild cytotoxicity activity and only one fraction showed the highest cytotoxicity activity. The fraction 02 had the highest percentage of viral replication inhibition, correlated with the viral dose and the product concentration, having a selectivity rate of 100; however, more research about the chemical structure of active compounds, and possible mechanisms of action are needed.

Diferentes concentraciones de 6 extractos de corteza de Pinus caribaea Morelet var. caribaea se enfrentaron a 2 dosis de virus en un ensayo in vitro, sobre células MT4; la actividad antiviral se midió por ensayo inmunoenzimático de captura de proteína 24 del virus. Todas las fracciones mostraron actividad citotóxica moderada y solo una fue altamente tóxica. La fracción 02 mostró un alto porcentaje de inhibición de la replicación viral, en relación con la dosis viral y la concentración del producto, con un índice de selectividad de 100, pero son necesarios estudios adicionales sobre la identificación de la estructura química para definir el mecanismo de acción del producto.

Objectives. To determine the prevalence of drug resistance and to analyze the subtyping in HIV-1 samples from Cuba. Methods. From an estimated total number of 1 950 HIV-1-infected persons in Cuba, a sample of 103 patients were studied, 76 of whom had received drug treatment for HIV and 27 who had not. The RNA plasma viral load was measured, and automated sequencing was used to assess resistance mutations to reverse transcriptase inhibitors (RTIs) and to protease inhibitors (PIs). Subtyping in the V3 region was performed using heteroduplex mobility assay (HMA). In order to corroborate the HMA results, sequencing of env (C2-V3-C3) was done with one-third of the samples in each of the subtype groups detected by HMA. Results. Out of the 103 samples, 81 of them (78.6%) were classified as subtype B, 19 (18.5%) as subtype A, and 3 (2.9%) as subtype C. The prevalence of resistance mutations was 26.2% to RTIs, none to PIs alone, and 3.9% to both categories of drugs. The prevalence of resistance to nucleoside RTIs (NRTIs) was 27.6% in treated patients and 7.4% in the untreated patients, and for nonnucleoside RTIs (NNRTIs) it was 5.3% and 0%, respectively. Among treated patients a low frequency (2.6%) of dual resistance to zidovudine (ZDV) plus lamivudine (3TC) and abacavir (ABC) was detected, and multidrug resistance to NRTIs was not found. In relation to PIs together with RTIs, the prevalence of resistance was 5.3% for treated patients and 0% for untreated patients. Conclusions. Even though Cuba is generally considered an area where subtype B is dominant, we detected a high proportion of non-B subtype viruses. The low prevalence of resistance mutations to RTIs and PIs reflects the delay in introducing these drugs to Cuba. Multidrug resistance to RTIs was not found, so, as of now, the use of these drugs continues to be an option for Cuban patients.

Objetivos. Determinar la prevalencia de la resistencia a los fármacos y analizar la presencia de mutaciones de resistencia genotípica en los subtipos B y no B del VIH-1 en Cuba. Métodos. Entre un total de 1 950 personas que se estima que están infectadas por el VIH-1 en Cuba, se estudió una muestra de 103 pacientes, de los cuales 76 habían recibido antirretrovíricos y 27 no. Se determinó la carga de ARN vírico en el plasma y se utilizó la secuenciación automatizada para detectar mutaciones de resistencia a los inhibidores de la transcriptasa inversa (ITI) y de la proteasa (IP). También se procedió a la subtipificación de la región V3 con prueba de movilidad de heteroduplex (HMA). Para confirmar los resultados de esta prueba se secuenció el gen env (C2-V3- C3) en un tercio de las muestras de cada uno de los subtipos detectados por HMA. Resultados. De las 103 muestras, 81 (78,6%) fueron clasificadas como pertenecientes al subtipo B, 19 (18,5%) al A y 3 (2,9%) al C. La prevalencia de mutaciones de resistencia fue del 26,2% para los ITI y 3,9% para los ITI más IP. Para los ITI nucleosídicos fue del 27,6% en los pacientes tratados y del 7,4% en los no tratados; para los ITI no nucleosídisos, las cifras correspondientes fueron del 5,3% y 0%, respectivamente. En los pacientes tratados se detectó una baja frecuencia (2,6%) de resistencia a la zidovudina más lamivudina y abacavir, y no se encontró multirresistencia a los ITI nucleosídicos. Para las combinaciones de IP e ITI, la prevalencia de la resistencia fue del 5,3% en los pacientes tratados y del 0% en los no tratados. Conclusiones. Aunque generalmente se considera que en Cuba predomina el sub-tipo B, en este estudio se detectó una alta proporción de virus del subtipo no B. La baja prevalencia de mutaciones de resistencia a los IP e ITI refleja la introducción más tardía de estos fármacos en el país. Como no se observó multirresistencia a los ITI, el empleo de estos fármacos sigue siendo una opción válida para los pacientes cubanos.

Inactivation of human herpes simplex virus I asa model of enveloped DNA virus was studied in the stages of production of intramuscular/ intravenous inmunoglobulins and human albumin, in the phases of alcohol fractionation for obtaining these products, and in the methods of removal and/or inactivation implemented in manufacture, pasteurization and ion - exchange chromatography. The virus was quantified by cytophatic effects. The cumulative reduction values reported in this paper proved that the use of alcohol fractionation in Cuba, as a variant of Cohn - Oncley method, combined with removal/inactivation procedures resulted in enveloped DNA virus inactivation assuring high biological safety for albumin and immunoglobulins for their use in human beings.

Se estudió la inactivación del virus herpes simple humano tipo 1 como modelo de virus ADN envueltos, durante las etapas de producción de las inmunoglobulinas intramuscular e intravenosa y la albúmina humana, las etapas del método de fraccionamiento alcohólico para la obtención de estos productos, así como los métodos de remoción y/o inactivación introducidos en el proceso de manufactura, pasteurización y cromatografía de intercambio iónico. El virus se cuantificó por efecto citopático. La obtención de valores de reducción acumulativos reportados en este trabajo demuestran que el método de fraccionamiento alcohólico utilizado en Cuba como variante del método de Cohn-Oncley, combinando métodos de inactivación/remoción, produce un nivel de inactivación de virus ADN envueltos que garantiza una alta seguridad biológica de estos productos para su uso en humanos.

In the period between 1991 and 1996, 26 352 serum samples from different risk groups and blood donors, were studied to know the seroprevalence of antibodies against the human T-lymphotropic virus type I (HTLV-I), and also as a continuation of researches carried out between 1989 and 1990. The ELISA DAVIH-HTLV-I system was used for the antibodies investigation, and as a certifying test, the Western Blot DAVIH-Blot HTLV-I was used too, both from the Cuban DAVIH Laboratories. The presence of anti HTLV-I antibodies was confirmed in 10 persons, and in most of them the epidemiologic study could elucidate the probable way of contagion. The seropositivity index observed was of 0,037 %, and is low if compared with the seroprevalence rates reported for the Caribbean area.

Se estudiaron, en el período comprendido desde 1991 hasta 1996, 26 352 muestras de suero procedentes de diferentes grupos de riesgo y donantes de sangre para conocer la seroprevalencia de anticuerpos contra el virus linfotrópico de las células T humanas tipo I (HTLV-I) y como continuación de investigaciones realizadas entre 1989 y 1990. Se empleó el sistema de ELISA DAVIH-HTLV-I para el pesquisaje de anticuerpos y como prueba confirmatoria, el Western Blot DAVIH-Blot HTLV-I, ambos de Laboratorios DAVIH, Cuba. Se confirmó la presencia de anticuerpos anti HTLV-I en 10 personas y en la mayoría de ellas el estudio epidemiológico logró esclarecer la vía probable de contagio. El índice de seropositividad observado fue de 0,037 %, lo que en comparación con las tasas de seroprevalencia reportadas para el área del Caribe resulta bajo.

The biological characteristics of 11 HIV-1 strains isolated from patients with a fast clinical evolution to AIDS were studied. The viral isolates were classified according to their replication kinetics and cell tropism. Taking into account these criteria, it was observed that 8 of the isolated strains (72,7 %) were of rapid high growth (RH) or slow low 3 (SL3) with preferential tropism to the lymphocytic stock, as it corresponds to AIDS patients. 3 (27,3 %) had characteristics of slow low 1 (SL1). The cytopatogenecity of the strains was studied in the MT4 celular line, and it was observed that most of them (72,7 %) were syncytium-inducing strains (SI), which allowed to prove the in vivo and in vitro relation of the biological properties. It was not so in 3 of the cultures (27,3 %) that behaved as non-syncytium inducers.

Se estudiaron las características biológicas de 11 cepas de VIH-1 aisladas de pacientes con rápida evolución clínica al sida. Los aislados virales se clasificaron según su cinética de replicación y tropimo celular, con estos criterios se observó que 8 de las cepas aisladas (72,7 %) resultaron de crecimiento rápido alto o lento bajo 3 y con tropismo preferencial a la estirpe linfocítica, como corresponde a los pacientes con sida, mientras 3 (27,3 %) tuvieron características de lenta baja 1. La citopatogenicidad de las cepas se estudió en la línea celular MT4 y se observó que la mayoría (72,7 %) resultó inductora de sincicios (IS), por lo que se comprobó relación in vivo e in vitro de las propiedades biológicas, no ocurrió así en 3 de los cultivos (27,3 %) que se comportaron como no inductores de sincicios.